【2015版中国药典-中药篇】 藁本分析

■《中国药典》 收载情况

【来源】 本品为伞形科植物藁本Ligusticum sinense Oliv.或辽藁本Ligusticum jeholense Nakai et Kitag.的干燥根茎和根。秋季茎叶枯萎或次春出苗时采挖,除去泥沙,晒干或烘干。
【功能与主治】 祛风,散寒,除湿,止痛。用于风寒感冒,巅顶疼痛,风湿痹痛。
【含量测定】 阿魏酸照高效液相色谱法(通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(40:60)(用磷酸调节pH值至3.5)为流动相;检测波长为320nrn。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于2500。
对照品溶液的制备:取阿魏酸对照品适量,精密称定,加甲醇制成每lml含15µg的溶液,即得。
供试品溶液的制备:取本品粗粉约0.lg,精密称定,置10mL具塞离心管中,精密加人甲醇5ml,称定重量,冷浸过夜,超声处理(功率250W,频率40kHz)20分钟,再称定重量用甲醇补足减失的重量,摇匀,离心,吸取上清液,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 µL,注入液相色谱仪,测定,即得。

■藁本药材高效液相色谱方法的建立

【色谱行为描述】
  《中国药典》中藁本的含量测定以阿魏酸为质量评价依据,其在Inertsil ODS-3中的色谱特点为:在流动相组成为甲醇-水(磷酸调pH至2.4~3.0)系统时,流动相的比例对阿魏酸的分离具有显著的影响,甲醇比例在32-38%(v/v)之间均可以获得较好的分析效果。柱温对藁本的保留时间及阿魏酸的分离度有微小影响,温度降低10℃,保留时间增加5 min,且在30~40℃的温度范围内均可达到较好的分离效果。流动相的pH对阿魏酸的分离具有显著的影响,经考察pH为2.4~3.0时分离效果最佳且具有较宽的温度范围(25~40℃)和流动相比例范围(甲醇32%~38%);pH为3.5时,只适于药典条件(甲醇40%)下的分离;pH在3.7以上时,随着pH的增大,阿魏酸峰型发生较大改变,不能满足分析要求;且pH大于4.4时,在2 h内无法检测到阿魏酸峰。推荐流动相配比范围:甲醇:水(磷酸调pH至2.4~3.0)=(32-38):(68-62),柱温为30~40℃。经过考察,在流动相甲醇-水(磷酸调pH至2.4)比例为32:68,柱温40℃的色谱条件下能得到较满意的分析效果。
  藁本在上述色谱条件下,采用Shim-pack VP-ODS色谱柱表现出和Inertsil ODS-3色谱柱相似的色谱行为,同等条件下保留时间稍有提前、柱效相当。
样品来源: 本品为伞形科植物藁本Ligusticum sinenseOliv.或辽藁本Ligusticum jeholense Nakai et Kitag.的干燥根茎和根。
对照品: 阿魏酸(成都曼思特生物科技有限公司,批号:MUST-15091605,含量:99.32%)
对照品溶液的制备: 取阿魏酸对照品适量,精密称定,加甲醇制成每lml含15µg的溶液,即得。
供试品溶液的制备: 取本品粗粉约0.lg,精密称定,置10mL具塞离心管中,精密加人甲醇5ml,称定重量,冷浸过夜,超声处理(功率250W,频率40kHz)20分钟,再称定重量用甲醇补足减失的重量,摇匀,离心,吸取上清液,即得。

推荐使用色谱条件:   仪器配置:
色谱柱: Inertsil ODS-3 (4.6×250mm,5μm )   LC-20AD 低压泵
流动相: 甲醇-水(32:68)(用磷酸调节pH值至2.4)   SPD-20AV二极管阵列紫外可见光检测器
柱温: 40℃   DGU-20A5 脱气机
检测波长: 320nm   CTO-20AC柱温箱
流速: 1.0mL/min   SIL-20AC 自动进样器
进样量: 10μL    
*此条件同样适用于Shim-pack VP-ODS (4.6×250 mm, 5 μm),相关谱图见附注1。

■阿魏酸对照品溶液:

■供试品溶液:

■阿魏酸标准曲线:

■阿魏酸的重复性:

序号 对照品(14μL) 样品(20μL)
t/min 峰面积 t/min 峰面积
1 18.909 770226 19.010 1101120
2 18.933 774320 18.998 1104105
3 18.984 776361 18.991 1102944
平均值 18.942 773636 19.000 1102723
RSD/% 0.20 0.40 0.05 0.14

附注1:Shim-pack VP-ODS (4.6×250 mm,5 μm )色谱柱用于藁本分析

■藁本对照品溶液:

■供试品溶液:

* 实验数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供