【2015版中国药典-中药篇】野菊花分析

■《中国药典》 收载情况

【来源】 本品为菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L.的干燥头状花序。秋、冬两季花初开放时采摘,晒干,或蒸后晒干。
【功能与主治】 清热解毒,泻火平肝。用于疔疮痈肿,目赤肿痛,头痛眩晕。
【含量测定】 蒙花苷照高效液相色谱法(通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水-冰醋酸(26:23:1)为流动相;检测波长为334 nm。理论板数按蒙花苷峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备:取蒙花苷对照品适量,精密称定,加甲醇(必要时加热)制成每1 mL含25μg的溶液,即得。
供试品溶液的制备:取本品粉末(过三号筛)约0.25 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇100 mL,称定重量,加热回流3小时,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 µL,注入液相色谱仪,测定,即得。

■野菊花药材高效液相色谱方法的建立

【色谱行为描述】
  《中国药典》中野菊花的含量测定以蒙花苷为质量评价依据,蒙花苷在InertsilODS-3(4.6×250mm,5μm)中的色谱行为是:在流动相组成为甲醇-水-冰醋酸系统时,流动相的比例对蒙花苷及其相邻色谱峰的分离度有一定影响,流动相比例为甲醇:水:醋酸=52:46:2时,其分离效果与分析时间最合适,选择甲醇的比例在48%~57%(v/v)之间均可获得较好的分析效果;柱温对蒙花苷的保留时间及其相邻色谱峰的分离度有微小影响,经考察建议更优温度为30℃;流动相中醋酸对蒙花苷的分离度及拖尾因子均无明显影响,但对分析时间有一定的改变,在醋酸浓度2%(pH=2.01)时较为合适。推荐流动相配比范围:甲醇:水:冰醋酸(48~57):(41~51):(1~5),柱温范围:25~35℃。综上所述,经考察在流动相甲醇-水-冰醋酸比例为52:48:2,柱温30℃的色谱条件下能得到较满意的分析效果。
  野菊花在上述色谱条件下,采用Shim-pack VP-ODS色谱柱表现出和Inertsil ODS-3色谱柱相似的色谱行为,保留时间和柱效相当。
样品来源: 本品为菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L.的干燥头状花序。秋、冬两季花初开放时采摘,晒干,或蒸后晒干。
对照品: 蒙花苷(成都曼斯特生物科技有限公司,批号:MUST-15101207,含量:99.51%)
对照品溶液的制备: 取蒙花苷对照品适量,精密称定,加甲醇(必要时加热)制成每1 mL含25μg的溶液,即得。
供试品溶液的制备: 取本品粉末(过三号筛)约0.25 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇100 mL,称定重量,加热回流3小时,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

推荐使用色谱条件:   仪器配置:
色谱柱: InertsilODS-3 (4.6×250 mm,5 μm )   LC-20AD 高压泵
流动相: 甲醇-水-冰醋酸(26:23:1)   SPD-10AVP紫外可见光检测器
柱温: 30℃   DGU-20A3脱气机
检测波长: 334nm   CTO-10ASVP柱温箱
流速: 1.0mL/min   SIL-10ADVP 自动进样器
进样量: 20μL    
*此条件同样适用于Shim-pack VP-ODS(4.6×250 mm, 5 μm),相关谱图见附注1。

■蒙花苷对照品溶液:

■供试品溶液:

■蒙花苷标准曲线:

■蒙花苷的重复性:

序号 对照品(10μL) 样品(20μL)
t/min 峰面积 t/min 峰面积
1 13.041 1320558 12.924 1442579
2 13.083 1316741 12.950 1431804
3 13.020 1317305 13.013 1427972
平均值 13.048 1318201 12.960 1434118
RSD/% 0.24 0.16 0.35 0.53

附注1:Shim-pack VP-ODS (4.6×250mm,5μm )色谱柱用于野菊花分析

■蒙花苷对照品溶液:

■供试品溶液:

* 实验数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供