【2015版中国药典-中药篇】 当归分析

■《中国药典》 收载情况

【来源】 本品为伞形科植物当归Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根。秋末采挖,除去须根和泥沙,待水分稍蒸发后,捆成小把,上棚,用烟火慢慢熏干。
【功能与主治】 补血活血,调经止痛,润肠通便。用于血虚萎黄,眩晕心悸,月经不调,经闭痛经,虚寒腹痛,风湿痹痛,跌扑损伤,痈疽疮疡,肠燥便秘。酒当归活血通经。用于经闭痛经,风湿痹痛,跌扑损饬。
【含量测定】 阿魏酸照高效液相色谱法(通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验;以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.085%磷酸溶液(17:83)为流动相;检测波长为316nm;柱温35°C。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备:取阿魏酸对照品适量,精密称定,置棕色量瓶中,加70%甲醇制成每1mL含12µg的溶液,即得。
供试品溶液的制备:取本品粉末(过三号筛)约0.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加人70%甲醇20mL,密塞,称定重量,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,静置,取上清液滤过,取续滤液,即得。
本品按干燥品计算,含阿魏酸(C10H10O4)不得少于0.050%。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 µL,注入液相色谱仪,测定,即得。

■当归药材高效液相色谱方法的建立

【色谱行为描述】
  《中国药典》中当归的含量测定以阿魏酸为质量评价依据,其在Inertsil ODS-3中的色谱特点为:在流动相组成为乙腈-磷酸水溶液系统时,流动相的比例对阿魏酸的保留时间和分离度具有显著的影响,乙腈比例每降低1%,保留时间增加3min,且乙腈比例在14-17%(v/v)之间可以获得较好的分析效果;柱温对阿魏酸的保留时间影响较小,但对阿魏酸的分离度有影响,据考察柱温在30℃时分离度最好。流动相中磷酸的浓度对阿魏酸的分离在一定范围内没有明显影响,建议水相为0.01%~0.1%的磷酸溶液。推荐流动相配比范围:乙腈:(0.01-0.1%)磷酸溶液=(14-17):(86-83),柱温为30℃。经过考察,在流动相乙腈:0.085%磷酸溶液比例为16:84,柱温30℃的色谱条件下能得到较满意的分析效果。
  采用Shim-pack VP-ODS色谱柱对当归进行分析时,在流动相乙腈:0.085%磷酸溶液比例为(16-17):(84-83),柱温为30℃色谱条件下,表现出和Inertsil ODS-3色谱柱相似的色谱行为,柱效及分离度相当、保留时间有所提前。
样品来源: 本品为伞形科植物当归Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根。
对照品: 阿魏酸(成都曼思特生物科技有限公司,批号:MUST-15091605,含量:99.32%)
对照品溶液的制备: 取阿魏酸对照品适量,精密称定,置棕色量瓶中,加70%甲醇制成每1mL含12µg的溶液,即得。
供试品溶液的制备: 取本品粉末(过三号筛)约0.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加人70%甲醇20mL,密塞,称定重量,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,静置,取上清液滤过,取续滤液,即得。

推荐使用色谱条件:   仪器配置:
色谱柱: Inertsil ODS-3 (4.6×250mm,5μm )   LC-20AD 低压泵
流动相: 乙腈:0.085%磷酸溶液(16:84)   SPD-20AV二极管阵列紫外可见光检测器
柱温: 30℃   DGU-20A5 脱气机
检测波长: 316nm   CTO-20AC柱温箱
流速: 1.0mL/min   SIL-20AC 自动进样器
进样量: 10μL    
*此条件同样适用于Shim-pack VP-ODS (4.6×250 mm, 5 μm),相关谱图见附注1。

■阿魏酸对照品溶液:

■供试品溶液:

■阿魏酸标准曲线:

■阿魏酸的重复性:

序号 对照品(10μL) 样品(10μL)
t/min 峰面积 t/min 峰面积
1 26.358 807715 26.487 627454
2 26.355 807344 26.292 625178
3 26.368 807163 26.330 623844
平均值 26.360 807407 26.370 625492
RSD/% 0.03 0.03 0.39 0.29

附注1:Shim-pack VP-ODS (4.6×250 mm,5 μm )色谱柱用于当归分析

■阿魏酸对照品溶液:

■供试品溶液(16%):

* 实验数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供