【2015版中国药典-中药篇】小蓟分析

■《中国药典》 收载情况

【来源】 本品为菊科植物刺儿菜Cirsium setosum(Willd.)MB.的干燥地上部分。夏、秋二季花开时采割,除去杂质,晒干。
【功能与主治】 凉血止血,散瘀解毒消痈。用于衄血,吐血,尿血,血淋,便血,崩漏,外伤出血,痈肿疮毒。
【含量测定】 蒙花苷照高效液相色谱法(通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-0.5%醋酸溶液(55:45)为流动相;检测波长为326nm。理论塔板数按蒙花苷峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备:取蒙花苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液,即得。
供试品溶液的制备:取本品粉末(过四号筛)约0.1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇10mL,称定重量,超声处理(功率100W,频率40kHZ)15分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液5µL与供试品溶液5µL,注入液相色谱仪,测定,即得。

■小蓟药材高效液相色谱方法的建立

【色谱行为描述】
  《中国药典》中小蓟的含量测定以蒙花苷为质量评价依据,蒙花苷在InertsilODS-3(4.6×250mm,5μm)中的色谱行为是:在流动相组成为甲醇-0.5%醋酸系统时,蒙花苷附近杂质峰较少,因此,流动相的比例在一定范围内对蒙花苷及其相邻色谱峰的分离度无显著影响,但对蒙花苷保留时间有较大影响,流动相甲醇的比例在55%,0.5%醋酸的比例在45%时,其分离效果与分析时间最合适,选择甲醇的比例在50%~58%(v/v)之间均可获得较好的分析效果;柱温对蒙花苷的保留时间及其相邻色谱峰的分离度有微小影响,经考察建议更优温度为30℃。流动相醋酸水中醋酸的浓度对蒙花苷及其相邻色谱峰的分离度有一定的影响,当醋酸浓度为1%时,蒙花苷与相邻杂质峰不能达到基线分离,而醋酸浓度为0.5%时,其分离效果与分析时间最合适。推荐流动相配比范围:甲醇:0.5%醋酸=(50-58):(50-42),柱温范围:25-40℃,流动相醋酸水中醋酸浓度:0.01%-1%。综上所述,经考察,在流动相甲醇-0.5%醋酸比例为55:45,柱温30℃的色谱条件下能得到较满意的分析效果。
  在上述色谱条件下,采用Shim-pack VP-ODS C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,也能获得良好的分析效果,柱效和采用InertsilODS-3色谱柱相当,保留时间比采用InertsilODS-3短3 min。
样品来源: 本品为菊科植物刺儿菜Cirsium setosum(Willd.)MB.的干燥地上部分。夏、秋二季花开时采割,除去杂质,晒干。
对照品: 蒙花苷(成都曼斯特生物科技有限公司、中国科学院成都生物研究所,批号:MUST-15101207,含量:99.51%)
对照品溶液的制备: 取蒙花苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液,即得。
供试品溶液的制备: 取本品粉末(过四号筛)约0.1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇10mL,称定重量,超声处理(功率100W,频率40kHZ)15分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

推荐使用色谱条件:   仪器配置:
色谱柱: InertsilODS-3 (4.6×250mm,5μm )   LC-10ADVP 高压泵
流动相: 甲醇-0.5%醋酸(55:45)   SPD-M10A紫外可见光检测器
柱温: 30℃   DGU-14A 脱气机
检测波长: 326nm   CTO-10ASVP柱温箱
流速: 1.0mL/min   SIL-HTC 自动进样器
进样量: 5μL    
*此条件同样适用于Shim-pack VP-ODS(4.6×250mm, 5μm)色谱柱,相关谱图见附注1。

■蒙花苷对照品溶液:

■供试品溶液:

■蒙花苷标准曲线:

■蒙花苷的重复性:

序号 对照品(5μL) 样品(5μL)
t/min 峰面积 t/min 峰面积
1 13.382 1412836 13.427 1681062
2 13.419 1410651 13.401 1014445
3 13.400 1413787 13.49 1015543
平均值 13.400 1412424 13.439 1680573
RSD/% 0.14 0.11 0.34 0.09

附注1:Shim-pack VP-ODS (4.6×250 mm,5 μm )用于小蓟分析

■蒙花苷对照品溶液:

■供试品溶液:

* 实验数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供