【2015版中国药典-中药篇】 款冬花分析

■《中国药典》 收载情况

【来源】 本品为菊科植物款冬Tussilago farfaraL.的干燥花蕾。
【功能与主治】 润肺下气,止咳化痰。用于新久咳嗽,喘咳痰多,劳嗽咳血。
【含量测定】 款冬酮照高效液相色谱法(通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(85:15)为流动相;检测波长为220nm。理论板数按款冬酮峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备:取款冬酮对照品适量,精密称定,加流动相制成每1mL含50μg的溶液,即得。
供试品溶液的制备:取本品粉末(过四号筛)约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇20mL,称定重量,超声处理(功率250W,频率40kHZ)1小时,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,取续滤液,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL,注入液相色谱仪,测定,即得。

■款冬花药材高效液相色谱方法的建立

【色谱行为描述】
  《中国药典》中款冬花的含量测定以款冬酮为质量评价依据,其在Inertsil ODS-3(4.6×250mm,5μm )中的色谱行为是:在流动相组成为甲醇-水系统时,峰与杂质峰距离较近,流动相的比例对款冬酮及相邻峰的分离有显著的影响,流动相的比例为甲醇-水(75:25)时其分离效果最好,款冬花色谱图中杂质峰与款冬酮峰的分离效果较好,且款冬酮峰的保留时间比较合适;柱温对款冬酮的保留时间及与相邻色谱峰的分离度有微小影响。推荐流动相配比范围:甲醇:水=(75-76):(25-24),柱温范围:25-40℃。经过考察,在流动相甲醇-水比例为75:25,柱温40℃的色谱条件下能得到较满意的分析效果。
  在上述色谱条件下,采用Shim-pack VP-ODS(4.6×250mm,5μm )色谱柱,柱效和采用Inertsil ODS-3(4.6×250mm,5μm )色谱柱相当,保留时间比采用Inertsil ODS-3(4.6×250mm,5μm )色谱柱短大约7min,亦可得到良好的分析效果。
样品来源: 本品为菊科植物款冬Tussilago farfaraL.的干燥花蕾。
对照品: 款冬酮(中国科学院成都生物研究所,批号:MUST-15092401,含量:98.92%)
对照品溶液的制备: 取款冬酮对照品适量,精密称定,加流动相制成每1mL含50μg的溶液,即得。
供试品溶液的制备: 取本品粉末(过四号筛)约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇20mL,称定重量,超声处理(功率250W,频率40kHZ)1小时,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,取续滤液,即得。

推荐使用色谱条件:   仪器配置:
色谱柱: Inertsil ODS-3 (4.6×250mm,5μm )   LC-20AD 高压泵
流动相: 甲醇-水(75:25)   SPD-10AVP紫外可见光检测器
柱温: 40℃   DGU-20A3脱气机
检测波长: 220nm   CTO-20AS柱温箱
流速: 1.0mL/min   SIL-10ADvp自动进样器
进样量: 10μL    
*此条件同样适用于Shim-pack VP-ODS(4.6×250mm, 5μm)色谱柱,相关谱图见附注1。

■款冬酮对照品溶液:

■供试品溶液:

■款冬酮标准曲线:

■款冬酮的重复性:

序号 对照品(10μL) 样品(10μL)
t/min 峰面积 t/min 峰面积
1 27.797 1294058 27.668 1517747
2 27.766 1289092 27.629 1517225
3 27.782 1291246 27.668 1519401
平均值 27.782 1291465 27.655 1518124
RSD/% 0.05 0.19 0.08 0.07

附注1:Shim-pack VP-ODS (4.6×250mm,5μm )色谱柱用于款冬花分析

■款冬酮对照品溶液:

■供试品溶液:

* 实验数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供