猪肉中多种兽药残留同时测定整体解决方案

  随着食品安全问题变得越来越严峻,如何对越来越复杂的样品基质中的多种兽药残留进行痕量分析及其快速简便的进行样品前处理已成为业界一个很大的挑战。本文采用岛津技迩的WondaPak QuEChERS专用产品对猪肉等动物源性食品进行净化,Shim-pack GIST色谱柱进行分离,串联质谱检测分析。猪肉基质添加浓度分别为10.0 μg/kg 和50.0 μg/kg,平行3份样品对55种兽残进行回收率和重现性数据考察,结果表明该方法操作简单、重现性好、回收率高,适用于猪肉等样品中55种兽药残留的同时测定。

1、实验耗材

耗材 货号 描述 规格
WondaPak QuEChERS 多兽残专用提取包 5010-050123 QuEChERS Extract Tubes for Vet Drugs In Foods 50/p
WondaPak QuEChERS 多兽残专用净化包 5010-002104 QuEChERS Dispersive Tubes for Vet Drugs In Foods 100/p
液相色谱柱 227-30001-04 Shim-pack GIST 100×2.1 mm,2 μm
移液枪 8510-10004 WondaPipet PMII-100 10-100 μL
8510-10006 WondaPipet PMII-1000 100-1000 μL
8510-10008 WondaPipet PMII-10 mL 1000-10000 μL
WondaDisc针式过滤器 8810-21322 Nylon(有机系)0.22 μm,13 mm 100/p
LC/MS认证样品瓶 227-34001-01 LabTotal Vial Certified Kit 100/p

2、 样品前处理

2.1 样品提取
 称取猪肉样品5.0 g,加5 mL 5%甲酸乙腈,手动振摇1 min,加入WondaPak QuEChERS多兽残专用提取包(5010-050123 QuEChERS Extract Tubes for Vet Drugs In Foods 50/p),手动振摇1 min,10℃下8000 rpm下离心5 min,取 1mL上清液待净化。

2.2 样品净化
 将1 mL 提取液转移至WondaPak QuEChERS多兽残专用净化包(5010-002104 QuEChERS Dispersive Tubes for Vet Drugs In Foods 100/p)中,涡旋混合1 min,12000 rpm下离心2 min,取上清液,过0.22 μm微孔滤膜,进LC-MS/MS分析。

3、分析条件

3.1 仪器配置
Shimadzu LC-30A 与 LCMS-8050 联用系统

3.2 UPLC 条件
色谱柱:Shim-pack GIST,100×2.1 mm,2 μm (P/N:227-30001-04)
流 速:0.3 mL/min
进样量:1 μL
柱 温:40 ℃
流动相: A:0.1%甲酸水 B:乙腈
梯度洗脱程序如下:

时间(Min) 0 3 8 11 12 17
A(%) 90 80 65 5 90 90
B(%) 10 20 35 95 10 10

3.3 质谱条件
电离模式:ESI       扫描方式: 正离子扫描
检测方式:多反应监测    离子喷雾电压:4.0 KV
雾化气:氮气 3 L/min   干燥气:氮气 10 L/min
加热气:氮气 10 L/min   碰撞气:氩气
DL温度:250 ℃      加热模块温度:400 ℃
离子源温度:300 ℃

各化合物MRM参数见下表
序号 兽药名称 前体离子
(m/z)
产物离子
(m/z)
Q1 Pre Bias CE Q3 Pre Bias
1 甲硝唑 172.1 82.3 -12 -24 -30
172.1 128.3 -20 -15 -10
2 磺胺二甲异嘧啶 279.0 124.3 -10 -20 -10
279.0 186.2 -10 -16 -17
3 地美硝唑 142.1 96.3 -17 -18 -21
142.1 95.3 -17 -23 -30
4 磺胺嘧啶 251.0 65.3 -12 -44 -24
251.0 156.2 -16 -15 -30
5 磺胺噻唑 256.0 156.2 -13 -14 -13
256.0 92.3 -13 -25 -19
6 磺胺吡啶 250.0 92.2 -12 -27 -16
250.0 65.3 -13 -45 -25
7 氟罗沙星 369.9 326.3 -18 -19 -29
369.9 269.2 -18 -27 -23
8 甲氧苄啶 291.0 230.3 -15 -24 -21
291.0 123.3 -11 -24 -10
9 伊诺沙星 321.0 303.2 -12 -20 -29
321.0 232.1 -12 -35 -21
10 磺胺甲基嘧啶 265.0 92.23 -10 -28 -19
265.0 65.3 -10 -47 -27
11 诺氟沙星 320.0 302.2 -12 -21 -12
320.0 282.3 -17 -29 -27
12 土霉素 460.9 426.2 -13 -20 -27
460.9 443.2 -13 -14 -19
13 氧氟沙星 362.0 318.2 -13 -19 -13
362.0 261.2 -13 -27 -25
14 替硝唑 248.1 121.3 -12 -16 -10
248.1 128.3 -12 -21 -10
15 培氟沙星 334.0 290.3 -12 -18 -28
334.0 316.2 -12 -21 -30
16 环丙沙星 332.0 314.2 -10 -21 -13
332.0 231.2 -10 -36 -22
17 达氟沙星 358.0 340.2 -13 -26 -30
358.0 82.3 -11 -46 -29
18 洛美沙星 352.0 265.2 -13 -25 -25
352.0 308.2 -13 -18 -29
19 四环素 444.9 410.2 -16 -20 -26
444.9 427.2 -16 -15 -28
20 磺胺二甲嘧啶 279.0 186.2 -10 -16 -17
279.0 124.3 -10 -24 -24
21 磺胺甲噻二唑 271.0 156.2 -10 -14 -14
271.0 92.23 -18 -28 -30
22 恩诺沙星 360.0 316.3 -13 -20 -13
360.0 245.2 -18 -27 -23
23 磺胺甲氧哒嗪 281.0 156.2 -10 -17 -13
281.0 92.3 -15 -30 -16
24 磺胺对甲基嘧啶 281.0 92.3 -10 -29 -15
281.0 108.2 -10 -25 19
25 奥比沙星 396.0 352.3 -14 -19 -15
396.0 295.2 -14 -25 -28
26 奥硝唑 220.1 128.3 -11 -16 -10
220.1 205.4 -21 -16 -19
27 沙拉沙星 385.9 368.2 -14 -23 -15
385.9 299.2 -11 -28 -29
28 双氟沙星 400.0 299.1 -14 -30 -12
400.0 356.2 -14 -20 -23
29 斯帕沙星 393.0 349.2 -14 -20 -14
393.0 292.2 -19 -25 -28
30 磺胺氯哒嗪 285.0 156.3 -11 -15 -30
285.0 92.3 -11 -27 -20
31 螺旋霉素 843.2 174.3 -24 -36 -14
843.2 101.3 -24 -39 -23
32 金霉素 478.9 444.0 -23 -22 -29
478.9 462.1 -17 -18 -20
33 磺胺甲恶唑 254.0 65.2 -13 -45 -25
254.0 92.3 -13 -27 -19
34 磺胺邻二甲氧嘧啶 311.0 156.2 -12 -18 -13
311.0 108.3 -12 -25 -23
35 强力霉素 445.2 428.1 -10 -19 -18
445.2 321.1 -10 -31 -20
36 磺胺二甲异恶唑 268.0 156.2 -10 -13 -13
268.0 65.2 -10 -47 -25
37 替米考星 869.2 696.4 -10 -44 -30
869.2 174.3 -20 -44 -15
38 磺胺二甲基哒嗪 311.0 156.3 -12 -21 -13
311.0 92.3 -16 -32 -19
39 磺胺奎恶啉 301.0 156.2 -11 -16 -13
301.0 92.3 -11 -29 -18
40 红霉素 734.1 158.3 -26 -31 -13
734.1 576.4 -20 -21 -24
41 氟甲喹 262.0 244.2 -13 -17 -23
262.0 202.2 -13 -32 -18
42 吉它霉素 772.1 109.2 -22 -44 -28
772.1 174.3 -22 -33 -15
43 苯唑西林 401.8 114.3 -20 -38 -28
401.8 160.2 -29 -14 -18
44 交沙霉素 828.1 109.3 -24 -45 -27
828.1 174.2 -24 -34 -14
45 双氯西林 469.8 160.2 -26 -14 -13
469.8 311.0 -14 -16 -21
46 睾酮 289.2 109.3 -11 -25 -15
289.2 97.2 -14 -25 -26
47 奈夫西林 414.9 199.3 -12 -15 -17
414.9 171.3 -12 -37 -15
48 黄体酮 315.2 97.2 -15 -25 -23
315.2 109.3 -15 -27 -29
49 甲砜霉素 354.0 185.2 12 19 12
354.0 227.2 12 13 15
50 氟苯尼考 356.0 185.2 12 18 12
356.0 336.1 12 10 12
51 氯霉素 321.0 152.2 11 16 10
321.0 257.2 11 12 12
52 氢化可的松 407.0 331.2 20 18 12
407.0 297.1 20 30 11
53 地塞米松 437.0 361.3 12 18 13
437.0 307.2 12 31 11
54 氟氢化可的松 467.0 420.8 13 11 11
467.0 321.0 11 11 27
55 双烯雌酚 265.0 97.0 14 24 15
265.0 93.1 13 25 27

4、实验结果

4.1 标准样品的MRM色谱图

4.2 猪肉中多种兽药的LC-MS/MS检测添加回收结果
将猪肉空白样品进行10.0 μg/kg 和50.0 μg/kg浓度加标后,按照上述前处理方法处理后上机,平行3份样品考察回收率和RSD,具体结果如下:10.0 μg/kg加标浓度的加标回收率为34.97%-119.98%,RSD为0.49%-13.31%;50.0 μg/kg加标浓度的加标回收率为35.69%-115.16%,RSD为0.20%-10.71%。

序号 兽药名称 添加水平(10 μg/kg) 添加水平(50 μg/kg)
回收率(%) RSD(%) 回收率(%) RSD(%)
1 甲硝唑 82.09 3.96 88.58 0.90
2 磺胺二甲异嘧啶 74.53 4.65 79.34 1.32
3 地美硝唑 92.72 1.86 99.98 0.65
4 磺胺嘧啶 92.79 3.97 99.07 2.56
5 磺胺噻唑 89.75 5.68 89.28 1.21
6 磺胺吡啶 87.57 4.33 95.55 1.53
7 甲氧苄啶 79.43 6.25 85.87 1.00
8 伊诺沙星 55.53 8.41 61.50 3.35
9 诺氟沙星 51.72 8.77 60.34 4.12
10 磺胺甲基嘧啶 97.00 4.51 107.50 1.36
11 土霉素 34.97 3.02 35.69 6.73
12 氧氟沙星 74.82 3.88 85.41 3.41
13 培氟沙星 74.00 2.61 71.90 1.94
14 替硝唑 102.19 0.95 108.08 2.48
15 环丙沙星 67.62 8.07 70.69 4.55
16 达氟沙星 65.09 4.83 81.10 4.99
17 洛美沙星 76.05 4.08 78.12 2.75
18 四环素 44.76 3.99 50.52 1.67
19 磺胺二甲嘧啶 93.56 7.78 102.44 0.70
20 恩诺沙星 83.03 8.23 92.97 3.52
21 磺胺甲噻二唑 83.03 8.23 98.06 4.08
22 磺胺甲氧哒嗪 88.67 4.83 102.80 0.62
23 磺胺对甲基嘧啶 100.50 5.10 103.63 1.38
24 奥比沙星 97.70 6.05 92.98 2.33
25 奥硝唑 76.34 3.54 103.62 2.50
26 沙拉沙星 100.80 5.76 92.19 3.39
27 双氟沙星 102.52 5.77 91.39 1.28
28 斯帕沙星 83.04 3.37 94.24 1.44
29 磺胺氯哒嗪 100.14 2.94 102.96 0.27
30 螺旋霉素 116.64 9.25 93.78 5.81
31 金霉素 73.89 1.26 60.73 5.54
32 磺胺甲恶唑 101.71 2.42 107.49 1.82
33 磺胺邻二甲氧嘧啶 103.88 7.34 107.98 1.23
34 强力霉素 94.66 0.49 71.84 4.34
35 磺胺二甲异恶唑 103.76 0.88 106.09 0.68
36 替米考星 111.15 8.27 115.16 10.71
37 磺胺二甲基哒嗪 104.31 3.33 106.55 0.59
38 磺胺奎恶啉 101.03 3.95 102.71 0.84
39 红霉素 71.68 13.14 78.36 10.19
40 氟甲奎 103.82 3.54 104.83 1.56
41 吉他霉素 105.89 4.92 106.40 0.21
42 苯唑西林 119.98 6.54 100.24 8.39
43 交沙霉素 112.39 9.90 112.64 1.95
44 双氯西林 116.79 7.78 107.48 2.92
45 奈夫西林 97.36 3.53 97.09 0.20
46 黄体酮 92.06 8.56 88.78 3.98
47 甲砜霉素 66.47 13.31 97.34 1.57
48 氟苯尼考 109.01 6.57 110.82 3.69
49 氯霉素 101.68 7.13 100.75 1.69
50 氢化可的松 96.32 1.55 95.04 1.35
51 地塞米松 98.27 0.88 98.57 2.63
52 氟氢化可的松 107.62 10.04 112.22 3.72
53 双烯雌酚 108.83 4.56 96.87 1.42
54 睾酮 110.89 8.15 90.34 3.23
55 氟罗沙星 100.04 1.81 86.92 6.77

5、实验结论

  综上,本方案采用岛津技迩的WondaPak QuEChERS产品对猪肉样品进行净化,Shim-pack GIST色谱柱进行分离,采用岛津串联质谱LCMS-8050检测分析,建立了猪肉样品中磺胺类、喹诺酮类、四环素类、硝唑类、β-内酰胺类、氯霉素类、激素类、大环内酯类等8类兽药残留的同时检测方法,该方法操作简单、分析速度快、重现性好,适用于猪肉等动物源性食品中多兽药残留量的同时测定。