人参中人参皂苷的测定

SGLC-LC-105

摘要:本文建立了人参中人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb1 的 HPLC 测定方法。结果表明,采用色谱柱 Shim-pack GISS C18(4.6×250 mm,5 μm )分析人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb1,人参皂苷 Rg1 峰的理论塔板数为 206394,远大于《中 国 药 典 》要求的 6000;人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re的分离度为 2.826,并且 3 个人参皂苷与相邻杂质峰能达到基线分离;标准品溶液和供试品溶液的保留时间和峰面积 RSD 小于 2% (n=3),满足《 中国 药 典 》要求。此方法可为人参中人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb1 的检测提供参考。
关键词:人参 人参皂苷 Shim-pack GISS C18 HPLC

1. 实验部分

1.1 实验仪器及耗材

■Shimadzu LC-20AD 高效液相色谱仪;
■色谱柱:Shim-pack GISS C18 (4.6×250 mm,5 μm;P/N:227-30061-07);
■WondaDisc 针式过滤器(P/N:8810-21322);
■LC/MS 认证样品瓶 LabTotal Vial(P/N:227-34001-01);
■WondaPipet 移液枪:WondaPipet PMII-100(P/N:8510-10004)、WondaPipet PMII-1000(P/N:8510-10006)。

1.2 分析条件

色谱柱:Shim-pack GISS C18 (4.6×250 mm,5 μm;P/N:227-30061-07)
柱温: 35℃
检测波长:203 nm
流速:1.0 mL/min
进样量:10 μL
流动相:A:水 B:乙腈

时间(Min) 0 35 55 75 100
A(%) 81 81 71 71 60
B(%) 19 19 29 29 40

1.3 对照品溶液的制备

取人参皂苷 Rg1 对照品、人参皂苷 Re 对照品、人参皂苷 Rb1 对照品适量,加甲醇制成每 1mL 含0.2 mg 的混合溶液,摇匀,即得。

1.4 供试品溶液的制备

取本品粉末(过四号筛)约 1 g,精密称定,置索氏提取器中,加三氯甲烷加热回流 3 小时,弃去三氯甲烷液,药渣挥干溶剂,连同滤纸筒移入 100 mL 锥形瓶中,精密加入饱和正丁醇50 mL,密塞,放置过夜,超声处理(功率 250W,频率 33kHz)30 分钟,滤过,弃去初滤液,精密量取滤液 25 mL,置蒸发皿中蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至 5 mL 量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

2. 结果及讨论

按照上述色谱条件(1.2)进行采集,对照品溶液色谱图和样品色谱图如下:

对照品溶液:

名称 保留时间 峰面积 峰高 拖尾因子 理论塔板数 分离度
人参皂苷Rg1 49.193 971962 59424 0.987 197713 ---
人参皂苷Re 50.364 741808 51267 0.983 263196 2.804
人参皂苷Rb1 86.117 649003 42971 0.866 710786 89.241

供试品溶液:

名称 保留时间 峰面积 峰高 拖尾因子 理论塔板数 分离度
人参皂苷Rg1 49.277 441102 27502 0.985 206394 ---
人参皂苷Re 50.437 366743 25711 0.984 271838 2.826
人参皂苷Rb1 86.150 446294 29817 0.880 730999 90.413

重现性

对照品溶液重现性

峰号 保留时间(min) 面积(Area)
数据1 数据2 数据3 RSD(%) 数据1 数据2 数据3 RSD(%)
1 49.232 49.193 49.259 0.07 973802 971962 973486 0.10
2 50.400 50.364 50.420 0.06 743439 741808 742784 0.11
3 86.211 86.117 86.114 0.06 649378 649003 651018 0.16

供试品溶液重现性

峰号 保留时间(min) 面积(Area)
数据1 数据2 数据3 RSD(%) 数据1 数据2 数据3 RSD(%)
1 49.277 49.307 49.246 0.06 441102 440395 438771 0.27
2 50.437 50.461 50.409 0.05 366743 366124 365988 0.11
3 86.150 86.215 86.270 0.07 446294 445156 452131 0.84

3. 结论

  本文建立了人参中人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb1 的 HPLC 测定方法。结果表明,采用色谱柱 Shim-pack GISS C18(4.6×250 mm,5 μm )分析人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb1,人参皂苷 Rg1 峰的理论塔板数为 206394,远大于《 中国 药 典 》要求的 6000;人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re 的分离度为 2.826,并且 3 个人参皂苷与相邻杂质峰能达到基线分离;标准品溶液和供试品溶液的保留时间和峰面积 RSD 小于 2% (n=3),满足《中国药典》要求。此方法可为人参中人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb1 的检测提供参考。

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